根據FDA個(gè)藥指南及CDE（國家藥品監督管理局藥品審評中心）建議，需進(jìn)行體外溶出研究、磷酸鹽動(dòng)力學(xué)結合研究和磷酸鹽平衡結合研究，以及體內臨床藥效終點(diǎn)研究，來(lái)評價(jià)受試制劑和參比制劑生物等效性研究。
截至目前醋酸鈣、碳酸鑭咀嚼片或顆粒、碳酸司維拉姆干混懸劑國內已有多個(gè)廠(chǎng)家通過(guò)一致性評價(jià)，但枸櫞酸鐵片目前國內還未有仿制藥上市。該品種體外磷結合等效性評價(jià)的方法是非常關(guān)鍵的部分，但該研究具體有哪些挑戰及關(guān)鍵注意事項？本文將結合指導原則要求與我司前期經(jīng)驗進(jìn)行具體討論與分析。
一、體外磷酸鹽結合等效性評價(jià)標準
FDA及CDE頒布的指導原則中，不同磷結合劑的體外等效性評價(jià)標準匯總如下：
▍復雜代謝路徑
枸櫞酸鐵在胃腸道中主要通過(guò)局部結合磷酸鹽發(fā)揮作用，而非系統性吸收，傳統血藥濃度檢測方法難以直接評估其生物等效性。
▍替代指標選擇
需依賴(lài)體外磷酸鹽結合能力、鐵釋放速率等替代參數，結合臨床終點(diǎn)（如血磷下降幅度、鐵代謝指標）進(jìn)行綜合判斷。
▍方法學(xué)局限性
體外試驗無(wú)法完全模擬人體胃腸環(huán)境（如pH波動(dòng)、食物成分干擾），需通過(guò)多批次重復試驗和交叉驗證提高數據可靠性（要求至少n=12）。
▍支持監管申報
FDA和EMA、NMPA均要求提交體外結合試驗數據作為仿制藥開(kāi)發(fā)的必要證據，以證明與原研藥的理化特性一致。
三、實(shí)驗設計研究要點(diǎn)
▍磷酸鹽濃度
結合試驗應至少包含8個(gè)不同的磷酸鹽濃度，包括達到結合平臺的最高磷酸鹽濃度，約最高磷酸鹽濃度1/10的最低磷酸鹽濃度，以及介于最高和最低之間的其余磷酸鹽濃度。
▍磷酸鹽動(dòng)力學(xué)結合研究測定時(shí)間點(diǎn)
每個(gè)條件下應在24 h內選擇至少8個(gè)時(shí)間點(diǎn)。需特別注意達到平臺期前的時(shí)間點(diǎn)不能太少，以反映受試制劑和參比制劑動(dòng)力學(xué)變化趨勢。
▍磷酸鹽平衡結合研究濃度和孵育時(shí)間
平衡研究磷酸鹽的濃度需結合正常體內每天攝入磷酸鹽量，制劑規格，溶液體積等綜合評定。孵育時(shí)間根據動(dòng)力學(xué)達到穩態(tài)的時(shí)間進(jìn)行合理選擇。
▍pH監控
對于動(dòng)力學(xué)和平衡試驗都需要提供詳細的pH監控方法、記錄、間隔時(shí)間等。
四、實(shí)驗設計研究要點(diǎn)
重點(diǎn)參考中國藥典9012《生物樣品定量分析方法驗證指導原則》，需要考察系統適用性、定量限、準確度、精密度、稀釋可靠性、耐用性、殘留、基質(zhì)效應、膜吸附、穩定性等，以驗證方法準確可靠。
干擾考察：如加入了BES等pH穩定劑來(lái)配制磷酸鹽，還需要考察BES對磷酸鹽結合的影響，另外還需要考察輔料、原料藥、空白制劑對磷酸鹽檢測的干擾。
建議進(jìn)行ISR研究，以考察方法的準確性。
所有資料都需要按照等效性評價(jià)相關(guān)要求提供，如制劑來(lái)源、質(zhì)檢報告，分析計劃、分析報告、進(jìn)樣序列表、標曲質(zhì)控匯總表等。
五、體外磷結合藥動(dòng)學(xué)及平衡研究曲線(xiàn)
六、體外磷結合研究其他應用
除了抗高磷血癥藥物外，對于可能導致低磷血癥的補鐵劑（如蔗糖鐵、羧基麥芽糖鐵），也可以通過(guò)體外磷結果試驗評估藥物與磷酸根的結合能力，從而預測其在體內引起低磷血癥的風(fēng)險，為臨床用藥提供安全性依據。
湖南科銳斯醫藥的磷酸鹽動(dòng)力學(xué)和磷酸鹽平衡結合研究平臺，已成功開(kāi)發(fā)了碳酸鑭咀嚼片、枸櫞酸鐵片分析方法，并已經(jīng)助力客戶(hù)完成該品種體外磷酸鹽等效性評價(jià)研究。
專(zhuān)業(yè)團隊：以高級工程師領(lǐng)銜的核心骨干團隊成員56人，本科及以上比例100%，碩士及以上占比41%。
質(zhì)量體系：取得中國合格評定國家認可委員會(huì )（CNAS）實(shí)驗室認可證書(shū)。實(shí)驗過(guò)程采用電子化信息系（LIMS）統進(jìn)行全流程的記錄管理和生物樣本管理，并建立了滿(mǎn)足中美雙報的中英文體系。
特色品種：
外用制劑：洛索洛芬鈉凝膠貼膏、丙酸氟替卡松乳膏等
復方制劑：復方甘草酸苷等
內源性物質(zhì)：熊去氧膽酸、二十碳五烯酸等
體外磷結合劑：枸櫞酸鐵等
